En la actualidad se han desarrollados nuevos productos para el tratamiento de enfermedades humanas como anticuerpos y proteínas que requeiren ser producidas por células mamíferas dado a su complejidad, tamaño y las modificaciones posttransalacionales que requieren. Para lograr que la célula mamífera produzca la proteína o anticuerpo de interés es necesario aislar una célula del organismo y fusionarla con un tumor canceroso (generalmente del mismo tipo de célula) para hacer la célula inmortal. Esto se debe a que una célula cancerosa es una célula que empieza a dividirse descontrolada e infinitamente y no muere; de ahí el porque un tumor cancerigeno continua creciendo. Luego de eso el próximo paso es introducir el gen humano a la célula mamífera para que esta exprese la característica codificada en la secuencia del gen.
La introducción de genes en células mamíferas es un proceso muy difícil y poco eficiente. Usualmente se usan dos técnicas para introducir el gen al genoma de la célula mamífera: transfección e infección. . Transfección es el proceso de insertar un gen por medio de la utilización de cargadores físicos o mecánicos como lo seria el proceso de electroporación. Electroporación es el proceso por el cual la célula que se desea transformar es inducida por una corriente eléctrica a formar micro poros en su membrana por donde pasa el vector que carga la secuencia genética que queremos añadir al genoma de la célula mamífera. La otra forma es infección llevada a cabo por un virus. El virus es usado como cargador biológico donde el genoma viral lleva el gen humano que queremos insertar en la célula mamífera. Además del gen humano que se quiere insertar el vector que se introduce al genoma de la célula mamífera debe tener otro gen como marcador que nos ayude luego a identificar cuales células fueron transformadas efectivamente y cuales no. La mayoría de las veces un marcador puede ser un gen que le confiera a la célula resistencia a la presencia de algún compuesto tóxico o algún antibiótico.
Luego de esto se crea un medio donde la célula pueda crecer adherida a las paredes del reactor que contiene los nutrientes o en suspensión o sea flotando en un medio líquido. Una vez las células poseen las caracteristicas deseadas se crea un “Cell Bank” o una reserva de la célula donde se guardan las células para luego ser utilizadas. Los cell bank están regidos por las normas cGMP (current good manufacturing practices) y por las agencias reguladoras como la FDA para que la células que allí se guarden cumplan con los requisitos mínimos de seguridad establecidos para que no exista contaminación de la nueva célula y esta permanezca con las características adquiridas. Ya la células contiene la inserción del gen humano de interés por lo que ahora se colocan en un un medio rico en proteínas, vitaminas y minerales para que se desarrollen y dividan a la vez que liberen al medio el producto de interés. Anteriormente las células mamíferas eran crecidas en medios que contenian sueros provenientes de animales lo que era una fuente de contaminación viral y bacteriana causando un problema a la hora de purificar el producto por su alto contenido de proteínas. En la actualidad los medios utilizados son libres de suero lo que minimiza la contaminación y permite una purificación más eficiente del producto de interés.
Referencias:
Introduction of genes into mammalian cells http://boatman.med.wayne.edu/~xray/Lect_3.pdf
Media development for mammalian cell culture http://or-live.mediwire.com/main/default.aspx?p=content&articleID=162438
Gracias por poner las fotos de las diferentes células. El artículo es bastante claro; tuve problemas cuando hablan de ponerlas a crecer en las paredes del bioreactor porque me las imagino pegadas a las paredes y no entiendo cómo le proveen los nutrientes necesarios. Quisiera saber cómo se hacen los "Cell Banks", si es algo pareceido a cuando se hacen "frozen stocks" de bacterias.
El artículo quedo muy bien. Pude visualizar el proceso bastante bien. Quería preguntar si era en un medio líquido en donde se coloca la célula despues de la inserción del gen de interés. O si existía otra forma para desarrollarse y liberar el producto. Me gustaron mucho las láminas.
Para mi, que no tenia el conocimiento de como se llevaba a cabo este proceso la explicacion que dieron me ayudo muchisimo a tener una idea bastante amplia del concepto. De verdad que esta bien sencilla y completa. Las laminas dan a conocer la diversidad de las formas de las celulas mamiferas que utilizan, me encantaron.
En mi opinión la descripción del tema es muy buena, ya que abarca los detalles más importantes relacionados con esta técnica. Gracias a esta información pude aclarar mis dudas y sobre todo entender en que se basa la técnica. En cuanto a las fotos están muy interesantes por que muestra la diversidad de células y sobre todo son tan reales que uno se puede imaginar a las células en frente. Mi pregunta es por que dicen que la introducción de genes en células mamíferas es un proceso muy difícil y poco eficiente, a que se refieren cuando dicen esto.
La forma de describir esta tecnología fue muy clara y concisa.Se entiende muy bien. Sería muy interesante saber en concreto por que, si el proceso es tan difícil e ineficiente, vale la pena para todas estas compañías biotecnológicas el utilizarlo.
Entiendo que la informacion es bastante completa y se puede entender como se lleva a cabo el proceso. De acuerdo al comentario de Aimee, cual ustedes entienden que es el medio ideal para la insercion de genes a las celulas mamiferas, tomando en cuenta el costo de produccion y la calidad del proceso?
En cuanto al artículo, los felicito por haber tomado el tiempo de escribir las cosas en detalle , pero explicadas de una forma sencilla. NUNCA me hubiera imaginado que para poder aumentar la cantidad de células mamíferas se necesita fusionarlas con un tumor canceroso. Sin embargo, si lo conocen, me pueden explicar cómo se fusiona un tumor canceroso con una célula? Me encantaria saber si hay otros métodos además de fusión con tumores cancerosos para hacer que la célula prolifere... Otro comentario que tenía que hacer es que estoy igual de confundida que Aliana en lo de las paredes del bioreactor teniendo nutrientes. En adición, deberían revisar el artículo por errores gramaticales (ya que encontre varios) para que no les quiten tantos puntos. (Ej. requeiren, posttransalacionales, un un medio, etc.)
Muy buen artículo para describir ésta técnica y excelentes imágenes de éstas células. De todo lo que logré captar ésta información sólo tengo dudas al igual que algunas de las compañeras, de a que se refieren cuando señala el paso de "las células se adhieren al reactor". También si podrían porque señlan que el proceso es difícil e ineficiente, ¿es un riesgo de inversión para las industrias biotecnológicas?
Los felicito porque hicieron un trabajo muy bueno. Tengo la misma duda de Myriam, si el proceso de cultivar y mantener celulas mamiferas es tan cuesta arriba ¿por que hay companias que prefieren esta tecnica a otras mas sencillas como es la utilizacion de hongos o bacterias?. Tambien me gustaria saber un poco mas sobre como se logra la fusion de la celula mamaria con la cancerosa, ya que es realmente interesante este ultimo dato.
A mi entender la descripción de la tecnología esta bastante clara, la organizaron bien, hicieron un buen trabajo. Pero tengo la misma duda que Aimeé, quisieran que explicaran por que la introducción de genes en células mamíferas es un proceso muy difícil y poco eficiente.
Me parece que dieron una buena explicacion sobre su tecnologia. Al igual que mis otros companeros me parece muy interesante que se utilicen celulas cancerosas para llevar a cabo el proceso de insercion de gen. Tambien tengo la duda de Amarilis, en cuanto a por que se utiliza este proceso en las industrias biotecnologicas si en muy dificil de realizar ?
Me gustaria que comentaran sobre el termino de hibridoma y dieran detas de produccion de anticuerpos monoclonales
Mencionen companias que usan esta tecnologia para produccion de medicamentos.
Buenoo estoy buscabdo de celulas i no encuerntro ni una mierda en esto menoss :P jajaajajajajajajaa bsuenoo yo soi lindaa:) jjajajjajajajajaja cualqieraaa nose que mierda decir asi que me voiii sii :)
Los que qieren tener algo conmigo aviseme:) los amo