Células Mamíferas: Descripción de la tecnología
En la actualidad se han desarrollados nuevos productos para el tratamiento de enfermedades humanas como anticuerpos y proteínas que requeiren ser producidas por células mamíferas dado a su complejidad, tamaño y las modificaciones posttransalacionales que requieren. Para lograr que la célula mamífera produzca la proteína o anticuerpo de interés es necesario aislar una célula del organismo y fusionarla con un tumor canceroso (generalmente del mismo tipo de célula) para hacer la célula inmortal. Esto se debe a que una célula cancerosa es una célula que empieza a dividirse descontrolada e infinitamente y no muere; de ahí el porque un tumor cancerigeno continua creciendo. Luego de eso el próximo paso es introducir el gen humano a la célula mamífera para que esta exprese la característica codificada en la secuencia del gen.
La introducción de genes en células mamíferas es un proceso muy difícil y poco eficiente. Usualmente se usan dos técnicas para introducir el gen al genoma de la célula mamífera: transfección e infección. . Transfección es el proceso de insertar un gen por medio de la utilización de cargadores físicos o mecánicos como lo seria el proceso de electroporación. Electroporación es el proceso por el cual la célula que se desea transformar es inducida por una corriente eléctrica a formar micro poros en su membrana por donde pasa el vector que carga la secuencia genética que queremos añadir al genoma de la célula mamífera. La otra forma es infección llevada a cabo por un virus. El virus es usado como cargador biológico donde el genoma viral lleva el gen humano que queremos insertar en la célula mamífera. Además del gen humano que se quiere insertar el vector que se introduce al genoma de la célula mamífera debe tener otro gen como marcador que nos ayude luego a identificar cuales células fueron transformadas efectivamente y cuales no. La mayoría de las veces un marcador puede ser un gen que le confiera a la célula resistencia a la presencia de algún compuesto tóxico o algún antibiótico.
Luego de esto se crea un medio donde la célula pueda crecer adherida a las paredes del reactor que contiene los nutrientes o en suspensión o sea flotando en un medio líquido. Una vez las células poseen las caracteristicas deseadas se crea un “Cell Bank” o una reserva de la célula donde se guardan las células para luego ser utilizadas. Los cell bank están regidos por las normas cGMP (current good manufacturing practices) y por las agencias reguladoras como la FDA para que la células que allí se guarden cumplan con los requisitos mínimos de seguridad establecidos para que no exista contaminación de la nueva célula y esta permanezca con las características adquiridas. Ya la células contiene la inserción del gen humano de interés por lo que ahora se colocan en un un medio rico en proteínas, vitaminas y minerales para que se desarrollen y dividan a la vez que liberen al medio el producto de interés. Anteriormente las células mamíferas eran crecidas en medios que contenian sueros provenientes de animales lo que era una fuente de contaminación viral y bacteriana causando un problema a la hora de purificar el producto por su alto contenido de proteínas. En la actualidad los medios utilizados son libres de suero lo que minimiza la contaminación y permite una purificación más eficiente del producto de interés.
Referencias:
Introduction of genes into mammalian cells http://boatman.med.wayne.edu/~xray/Lect_3.pdf
Media development for mammalian cell culture http://or-live.mediwire.com/main/default.aspx?p=content&articleID=162438
Aliana dijo
Gracias por poner las fotos de las diferentes células. El artículo es bastante claro; tuve problemas cuando hablan de ponerlas a crecer en las paredes del bioreactor porque me las imagino pegadas a las paredes y no entiendo cómo le proveen los nutrientes necesarios. Quisiera saber cómo se hacen los "Cell Banks", si es algo pareceido a cuando se hacen "frozen stocks" de bacterias.
22 Febrero 2006 | 05:24 PM